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发明名称:位点特异性生物素标记重组IgG亲和肽及其在三维定向固定IgG抗体中的应用
申请号:CN201310730765.6
公开/公告号:CN103694358B
公开/公告日:20151202
法律状态:授权
有效性:有效
申请人:潍坊医学院
发明人:唐金宝;杨洪鸣
地址:261053 山东省潍坊市奎文区胜利东街288号
摘要:
[详细]本发明公开了一种位点特异性生物素标记的IgG亲和肽,是在IgG亲和肽的羧基端以生物方式连接生物素构建而成,该位点特异性生物素标记的IgG亲和肽一经产生,无需体外标记即可定向亲和吸附于亲和素或链霉亲和素预包被的固相载体表面。本发明的位点特异性生物素标记重组IgG亲和肽,可用于将IgG抗体固定在固相载体表面,结合后,IgG抗体的Fab端可充分暴露,从而充分保持了抗体的抗原结合活性,进而可有效提高固相免疫分析的灵敏性、特异性与稳定性。本发明采用Avi-tag与IgG抗体亲和肽构建融合蛋白,解决了IgG抗体亲和肽的定向亲和固定,进而获得均一、Fab段充分暴露及保持高抗原结合活性的三维定向固相化IgG抗体。
首项权利要求:
[详细]一种位点特异性生物素标记重组?IgG?亲和肽在制备三维定向固定?IgG?抗体中的应用,其特征是,所述位点特异性生物素标记重组?IgG?亲和肽制备方法包括以下步骤:(1)根据(Gly-?Gly?-?Gly?-?Gly-Ser)3及Avi?基因序列,化学合成?(Gly4-Ser)3-Avi的基因片段,所述Avi?基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示,重组至pUC18载体,获得中间质粒载体;(2)设计引物以?PCR方式获得?IgG?亲和肽基因,重组至步骤(1)获得的中间质粒载体,获得原核表达载体,其中所述的IgG?亲和肽为ZZ亲和肽;(3)原核表达载体转化感受态大肠杆菌?BL21,获得基因工程菌;(4)培养基因工程菌,培养基中含有生物素,依菌体内BirA酶同步催化,在所表达的目的蛋白的Avi序列的赖氨酸位点结合生物素;(5)纯化目的蛋白,获得生物素定点定量连接的IgG亲和肽;应用时,方法为:(A)首先,将位点特异性生物素标记的IgG亲和肽与预包被亲和素或链霉亲和素的聚苯乙烯载体以生物素-亲和素结合特异性定向吸附固定;(B)然后再利用IgG亲和肽与IgG抗体的特异性结合将IgG抗体Fc?端结合到?IgG?亲和肽上。
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      申请日 法律状态变更 代理人 代理机构 ipc 转让人 受让人 转让日 许可人 被许可人
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